El Servicio de Microscopía Láser Confocal y Multidimensional in vivo proporciona apoyo científico-tecnico en cualquier tema relacionado con microscopía óptica en una amplia variedad de muestras, con tamaños que van desde centímetros a nanómetros.

El servicio pertenece a REMOA, Red Española de Microscopía Óptica Avanzada, y a la red de Laboratorios de la Comunidad de Madrid (REDLAB). Desde 2013 el servicio está certificado por AENOR.  Actualmente la certificación es según la Norma  9001:2015  "La asistencia técnica en la adquisición de imágenes de microscopía confocal mediante los equipos Leica TCS SP5 y TCS SP8 STED    3X".  CertificadoER-0286-2009_ES_2021-1220. 

SERVICIOS OFERTADOS

Confocales:

  • Adquisición de imágenes en distintos modos de escaneo: XY, Xt, XYZ, XZY, XYZʎ, XYZt..
  • Reconstrucciones 3D
  • Análisis FRAP (Fluorescence recovery after photobleaching),
  • Análisis FRET (Förster resonance energy transfer) y otros análisis dinámicos.
  • Fotoconversión
  • Análisis de colocalización de moléculas. Superresolución por STED en el LEICA TCS SP8 STED 3X
  • Multiposicionamiento e imágenes compuestas

Sistemas multidimensionales de microscopía  avanzada de fluorescencia para observación in vivo:

  • Adquisición de imágenes multidimensionales en X, Y, Z, t, y ʎ. Equipado con gran variedad de  filtros de fluorescencia que cubren todo el espectro visible desde el UV al infrarrojo cercano. Adquisición de time-lapse completamente automatizada.
  • FRET (Förster resonance energy transfer) con filtros CFP-YFP
  • Estudios ratiométricos de calcio (FURA) in vivo y otros estudios dinámicos.
  • Aplicaciones motorizadas: Multiposicionamiento por el que el usuario puede definir distintas posiciones XYZ en el mismo experimento para ser seguidas a lo largo del tiempo. Capacidad especialmente útil en estudios de procesos dinámicos en células vivas. Generación de imágenes compuestas: teniendo la capacidad de a partir de un punto, cubrir un área a determinar por el usuario, en el que el sistema hará imágenes y las compondrá en una sola, incluso con múltiples canales y 3 dimensiones.
  • Estudios de colocalización de proteínas in vivo con alta resolución espacial y temporal. La cámara Hamamatsu Orca Flash 4.0 LT tiene una resolución espacial de 2048 x2048 pixeles (con un tamaño de pixel de 6,5 µm), y una resolución temporal mínima de 30 frames por segundo (30 fps), con capacidad de llegar a 1000 fps. Tiene, además, acoplado un repartidor de haz (W-View Gemini) con filtros GFP/mCherry, lo que permite una adquisición simultanea de imágenes de estas dos proteínas fluorescentes, incrementando la resolución temporal, ya muy alta de esta CMOS, para estudios de colocalización, ratiométricos y otros estudios dinámicos. Software de adquisición y análisis: Metamorph (Molecular Devices).

Microscopio de epifluorescencia con cámara CMOS

Microscopio invertido Leica DMIRE2 con iluminación LED. Contraste Interdiferencial (DIC). Cubos de fluorescencia para DAPI, GFP, FITC, CFP, YFP, TXR, DsRED, RHOD, Y5. Cámara Hamamatsu Orca Flash 4.0 LT. (Sensor CMOS FL-400; Pixeles: 2048 x 2048; Área efectiva: 13,312 mm x 13,312 mm; Eficiencia cuántica (QY) > 70% at 600 nm; Binning digital 2x2 / 4x4.). 

Microscopio de epifluorescencia con cámara CCD

Microscopio Axioplan Universal Zeiss con contraste de fase y epifluorescencia para UV, verde y rojo. Cámara Leica DFC350FX

Estereomicroscopio LEICA MZ16FA

Objetivo 1× AN 0,14 /oculares 10×. Rango del zoom ( 16:1): 7.1× – 115×. Resolución 420Lp/mm. Campo visual 29,6mm – 1,8mm (según combinación óptica). Cámara en color Leica DFC490 de 8 Mpx. Aplicaciones: Permite la observación de muestras y la captura de imágenes tanto con luz visible (base de diascopía con contraste de Rottermann, campo claro, campo oscuro, y fuente de luz fría), como con luz de epifluorescencia (UV, GFP, TXRed). Adquisición de imágenes en distintas resoluciones y formatos.

Procesamiento y análisis de imágenes con una estación de trabajo dedicada, con distintos software de tratamiento y análisis de imagen, incluyendo Metamorph offline.

El Servicio está equipado con un sistema de almacenamiento en red, modular y de gran capacidad donde se vuelcan las imágenes de todos los equipos, accesible mediante contraseña desde cualquier ordenador conectado a la intranet del CIB.

EQUIPOS DEL SERVICIO

  • Estereomicroscopio de fluorescencia Leica MZ16 FA con cámara en color Leica DFC490 con luz transmitida y filtros de fluorescencia para UV, GFP y TXR.
  • Cámara CCD Leica DFC350 FX sobre Microscopio Zeiss Axioplan. Contraste de fase y fluorescencia.
  • Cámara CMOS Hamamatsu Orca-Flash 4.0 LT sobre microscopio Leica DMIRE2. DIC y fluorescencia.
  • Microscopio confocal Láser (CLSM) LEICA TCS SP8 STED 3X. Láser 405 nm y Láser blanco sintonizable entre 470 y 670 cada nm. Láseres de deplección: 592 y 660 nm. Sistemas de AOTF (Acousto-Optical Tunable Filter), y AOBS (Acousto-Optical Beam Splitter). Platina motorizada. Sistema para mantener el control de tª, CO2 y humedad para placas p35, p60 y portaobjetos estándar
  • Microscopio confocal Láser (CLSM) LEICA TCS SP5 con 8 líneas de laser (405, 457, 477, 488, 496, 514, 543, 633 nm) Sistemas de AOTF (Acousto-Optical Tunable Filter), y AOBS (Acousto-Optical Beam Splitter). Platina motorizada.
  • Sistema multidimensional de microscopía  avanzada de fluorescencia de alta velocidad para observación in vivo Leica AF6000 LX. Equipado con microscopio invertido DMI6000B con cámara de cultivo termostatizada, control de CO2 y una cámara Hamamatsu CCD 9100-O2. Diversidad de filtros de fluorescencia y técnicas de luz transmitida. Platina motorizada. Programa de adquisición y análisis LASX de Leica
  • Microscopio de campo ancho DMi8 de Leica con cámara Orca-Flash 4.0 LT Digital CMOS, equipada con un divisor de haz (W-View Gemini) y con un tándem de filtros para GFP y mCherry  que posibilita la adquisición simultanea de ambas señales. Control de tª. Software de adquisición y análisis Metamorph (Molecular Devices).
  • Sistema de microfluídica CELLASIC ONIx2 que permite un estricto control de experimentos de célula viva combinando máxima funcionalidad y diversificación de muestras sobre las que se pueda operar: levaduras, bacterias y células animales; tanto para inmovilización de células como para experimentos de perfusión a largo plazo.
  • Estación de trabajo de análisis y procesamiento de imagen con distintos programas, incluido Metamorph offline y Huygens para deconvolución y análisis de colocalización. Sistema de almacenamiento de datos centralizado, accesible desde la Intranet del Centro.

El servicio ofrece además alícuotas de buen número de fluorocromos a precio reducido.  Fluorocromos.pdf

 

Instrucciones

Si el cliente pertenece al Centro de Investigaciones Biológicas (CIB) debe hacer la reserva en el calendario de la intranet: https://reservas.cib.csic.es/confocal/ con las credenciales de la intranet del CSIC según las siguientes NORMAS de Reservas.pdf

Los clientes externos al CIB se pondrán en contacto con el servicio mediante correo electrónico (confccd@cib.csic.es) o teléfono (911098001). La persona del servicio que recoja el mensaje hará la reserva en el calendario de la intranet. Además deberán aportar una serie de datos para rellenar la Oferta de Prestación de Servicio, que les será enviada desde la administración del Centro.

El horario del Servicio es de 8 a 17h, de lunes a miercoles, de 8 a 15h los jueves y de 8 a 14h los viernes.

Tarifas.pdf