Descripción
La viabilidad de las células germinales requiere múltiples mecanismos de control y regulación génica. Nuestro laboratorio ha estado enfocado en los últimos años a la caracterización y estudio de la regulación específica de genes que expresándose en las gónadas de mamíferos participan en el desarrollo de la gametogénesis. Para este objetivo, hemos usado ratón como modelo y diferentes abordajes experimentales incluyendo: generación de genotecas de cDNA a partir de células gametogénicas específicas; caracterización de los genes clonados; análisis de la expresión génica por microarrays y métodos citológicos; perfiles proteómicos y generación de ratones transgénicos. Dentro de esta línea, continuamos la caracterización funcional de genes expresados en la diferenciación de células germinales. Así, se prosigue el análisis funcional de una proteína con un patrón de expresión específico en espermatogénesis, previamente identificada por nosotros: Rnf19 (XYbp) con funciones de E3-ligasa implicada en el sistema de ubiquitinización y procesamiento por el proteasoma.
Asimismo, dos genes: PEA15 y mSTI1 que fueron clonados por nuestro grupo, en estudios previos sobre el efecto de disruptores endocrinos en células de Sertoli, han sido ahora estudiados desde el punto de vista funcional. PEA15 (Phosphoprotein Enriched in Astrocytes) parece jugar un papel protector de apoptosis en espermatocitos como lo demuestra el análisis en mutantes nulos (KO) de PEA15. Además, como PEA15 contiene dominios ERK (Extracellular signal-Regulated Kinase) en la región carboxilo terminal, se analizaron paralelamente la presencia de ERK2 en ratones KO y silvestres, demostrando que PEA15 posibilita la localización citoplásmica de ERK2 en células del epitelio seminífero, mientras que ERK2 en ratones KO se localiza exclusivamente en núcleo celular. Respecto a mST1, una co-chaperona homóloga a la proteína humana HOP (Organizadora de hsc70/hsp90), parece estar implicada en la respuesta a estrés en células de túbulos seminíferos.
Hemos iniciado nuevos modelos experimentales de estudio de la regulación de la expresión génica en ratón basados en "silenciamiento génico" por interferencia de RNA (iRNA), en células del epitelio seminífero, tanto in vitro como in vivo, mediante shRNAs. Los resultado indican, en animales adultos, la posibilidad experimental de silenciamiento de genico en un 40 % de la expresión génica basal de células de Sertoli transfectadas con shRNAs específicos. Recientemente, se ha comenzado una búsqueda y análisis de microRNAs (miRNAs) en estadios tempranos de la embriogénesis y la aportación gamética de miRNAs en estos estadios postzigóticos de la diferenciación.
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